1. 細胞爬片；
2. PBS清洗標本 3次，各1 min。
3. 冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min）；
4. 空氣干燥5min，PBS漂洗3min，3次；
5. 細胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透細胞，室溫15~30min（丙酮固定法不用此步驟）；
6. PBS漂洗2次，每次5min；
7. 3% H2O2去離子水室溫孵育10min，PBS洗；
8. 正常山羊血清封閉，37℃孵育10~20min，甩掉封閉液，勿洗；
9. 加適當比例的一抗工作液孵育，4℃過夜或37℃ 1~2h；
10. PBS漂洗2次，每次5min；
11. 加入酶標二抗工作液，37℃，30-60min；
12. PBS漂洗2次，每次5min；
13. 加DAB顯色劑顯色（或AEC顯色），鏡下觀察結果，適時終止；
14. 蘇木素輕度復染；
15. 脫水透明。
16. 封片，中性樹膠封片。
光學顯微鏡觀察，拍片。圖象評分。