切片制備：將組織塊平放于軟塑料蓋或特制小盒內（直徑2cm），如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織，然后將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內，當盒底部接觸液氮時即開始氣化沸騰，此時小盒保持原位切勿浸入液氮內，大約10-20秒組織即迅速冰凍成塊。取出組織冰塊立即置入-80℃冰箱儲存?zhèn)溆�，或置于恒冷切片機冰凍切片。冰凍切片4~8mm，冰凍切片后如不染色，必須吹干，儲存低溫冰箱內，或進行短暫預固定后儲存冰箱內保存。
1. 冰凍切片室溫放置30分鐘后，入4℃丙酮固定10分鐘，也可根據(jù)需要選擇其他方式。PBS洗，5min，3次；
2. 3% H2O2去離子水37℃孵育10min，PBS洗，5min，2次；
3. 5～10％正常山羊血清封閉，37℃孵育10-20min，傾去血清，勿洗；
4. 適當比例的一抗工作液孵育，4℃過夜或37℃ 1～2h；
5. 復溫20min，PBS洗3min，三次；
6. 二抗孵育：加生物素化標記二抗，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
7. 三抗孵育：加辣根酶標記的鏈酶卵白素，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
8. 加DAB顯色劑顯色（或AEC顯色），鏡下觀察結果，適時終止；
9. 蘇木素復染5min，自來水沖洗片刻，75%的鹽酸酒精溶液分化30s，自來水沖洗5min藍化；
10. 脫水。依次經(jīng)過70%、80%、90%、95%、無水乙醇，各2min，二甲苯15min，三次；
11. 封片，中性樹膠封片。
光學顯微鏡100×或400×觀察，拍片。
圖象評分。